
1 材料的选择和处理
取健壮枝条的顶芽或侧芽,剪除叶片,用无菌水擦洗干净,在无菌条件下,用0.1%的升汞溶液浸泡消毒10min,无菌水冲洗3~4次,将处理过的组织放入组培培养室中开始培养。
2 接种
在无菌条件下,将顶芽或侧芽切成3~5mm长的段,剥去茎尖外部鳞片和小叶,接种到培养基上,每瓶接5~7段。
3 培养
将顶芽或茎段,接种在MS + 0.5mg/L BA + 0. lmg/L NAA + 0. lmg/L GA培养基中培养,附加3%蔗糖,用0.5%琼脂固化。在温度25℃左右和光照下,5d后长出单生芽,4周后小芽长到1 cm并产生丛生苗。
将丛生苗分割接种在MS + 2mg/L BA + 0.5mg/L GA培养基中,附加蔗糖3% ,0.5%琼脂固化。
经培养小苗长到3~5cm高时,可以从节间处,将其切成小段进行继代培养,侧芽萌动,迅速生长。1个月可长到3~5cm高,继代培养可使侧芽苗不断增殖,从而获得大量可供繁殖的试管苗。
4.切下带顶芽的苗,插在1/2MS+1mg/L GA + 2%蔗糖的培养基上培养。约4、5周后,在自然光照下,生根发育成完整植株,供移栽。
MS(Murashige & Skoog)培养基是目前普遍使用的培养基。它有较高的无机盐浓度,对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利。MS固体培养基可用来诱导愈伤组织,或用于胚、茎段、茎尖及花药培养,它的液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显成功。
B5培养基的主要特点是含有较低的铵,这是因为铵可能对不少培养物的生长有抑制作用。有些植物的愈伤组织和悬浮培养物在MS培养基上生长得比B5培养基上要好,而另一些植物,在B5培养基上更适宜。 N6培养基特别适合于禾谷类植物的花药和花粉培养。 怀特(While)培养基由于无机盐的数量比较低,更适合木本植物的组织培养。