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CRISPR/Cas9技术的原理与应用
1、通过将dCas9与基因的转录起始位点结合，可以有效阻断转录的启动，进而抑制基因的表达；将dCas9结合至基因的启动子区域，也能与转录抑制/活化物结合，调控下游靶基因的转录。
2、CRISPR/Cas系统是一种原核生物的天然免疫系统，用以抵御噬菌体病毒等外源遗传物质的侵袭。
3、CRISPR/Cas系统通过识别并切断外源DNA，以抑制外源基因的表达，抵御噬菌体病毒等外源遗传物质的入侵，其原理与真核生物中的RNA干扰（RNAi）相似。
4、CRISPR/Cas技术作为基因编辑的利器，能够对基因进行精确的定点编辑，在gRNA和Cas9蛋白的共同作用下，待编辑的细胞基因组DNA被精确剪切。
5、目前最广泛应用的CRISPR系统为II型CRISPR-Cas系统，即CRISPR-Cas9系统，其作用机理可分为三个阶段理解。
基因敲除技术详解
1、基因敲除技术是指在基因序列中插入两个Flox位点，通过与Cre小鼠杂交激活Flox位点，从而敲除两个Flox位点之间的基因序列。
2、广义的基因敲除包括完全敲除、部分敲除、基因调控序列敲除以及成段基因组序列敲除，通常采用同源重组方法，通过观察生物或细胞的表型变化来研究基因功能。
3、基因敲除技术是一种将已知序列的DNA片段与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，整合至受体细胞基因组中并得到表达的外源DNA导入技术。
基因敲除技术概述
具体介绍：基因敲除技术自20世纪80年代末发展起来，通过特定途径使机体特定基因失活或缺失，基因敲除（Knock-out）Cas9可以对靶基因组进行剪切，形成DNA的双链断裂，细胞通常采用非同源末端连接（NHEJ）高效修复断裂的DNA。
基因敲除的步骤包括选择实验胚胎、开始敲除，通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的，基因敲除就是利用各种技术将特定基因从染色体上移除，并替换为新基因，基因剔除则是通过DNA重组技术剔除或破坏生物体基因组内某一特定基因，观察由此引起的表型改变。
基因敲除技术方法解析
1、基因敲除技术是通过特定技术方法使机体特定基因失活或缺失，针对已知序列但功能未知的基因，改变生物遗传基因，使特定基因功能丧失，进而屏蔽部分功能，进一步影响生物体。
2、基因敲除技术是指在基因序列中插入两个Flox位点，通过与Cre小鼠杂交激活Flox位点，从而敲除两个Flox位点之间的基因序列。
3、广义的基因敲除包括完全敲除、部分敲除、基因调控序列敲除以及成段基因组序列敲除，通常采用同源重组方法，通过观察生物或细胞的表型变化来研究基因功能。
4、传统细菌基因敲除基于细菌中广泛存在的RecBCD系统，外源DNA片段（主要是自杀质粒）通过电转化或接合方式进入受体菌，与基因组同源片段进行重组，实现基因的插入突变与缺失突变。
5、基因敲除技术通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的，它克服了随机整合的盲目性和偶然性，是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。
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