- 1、为何融合诱导的细胞需先在20%血清培养基中培养，再使用HA培养基
- 2、B细胞杂交瘤技术中用于细胞融合的选择培养基是什么
- 3、PEG细胞融合的关键步骤有哪些
- 4、融合后的杂交瘤细胞通常采用哪种培养基进行筛选纯化
为何融合诱导的细胞需先在20%血清培养基中培养，再使用HA培养基
氨基蝶呤能够干扰细胞的起始合成途径，因此在含有氨基蝶呤的培养基中，细胞只能进行中间合成途径，这就要求必须提供核苷酸，对于缺少中间合成途径的细胞，它们会因无法增殖而逐渐死亡。
在第一次筛选中，目标是获取杂交瘤细胞，由于A、B两种细胞融合后可能出现A、B、AA、BB、AB五种组合，筛选的目标是AB型细胞，第二次筛选则针对能够产生抗体的AB型细胞，这一过程通常利用选择培养基来完成。
由于骨髓瘤细胞在体外培养液中具有长期增殖的特性，它们能够在HAT培养液中筛选并存活下来，并持续增殖。
这一技术被称为杂交瘤技术，是免疫学领域的一次重大突破。
HAT选择性培养基是根据次黄嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸生物合成途径设计的。
B细胞杂交瘤技术中用于细胞融合的选择培养基是什么
【答案】：用于筛选具有次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)和胸苷激酶(TK)活性缺陷细胞的培养基，内含次黄嘌呤(hypoxanthine)、氨基喋呤(aminopterin)和胸腺嘧啶核苷(thymidine)三种，简称HAT，这种选择培养基常用于筛选杂交瘤细胞。
【答案】：HAT培养液的作用是筛选杂交瘤细胞。
在培养基中添加次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶核苷。
PEG细胞融合的关键步骤
1. 使两个细胞相互靠近并凝聚；2. 在37℃下，病毒与细胞膜反应，导致细胞膜破坏，此时需要Ca2+和Mg2+，最适宜pH值为6-7；3. 细胞膜连接部穿通，周边连接部修复，此时需要Ca2+和ATP；4. 融合成巨大细胞，仍需ATP。
2. 细胞融合的具体步骤包括：（1）细胞准备，分为贴壁细胞和悬浮细胞两种，前者可以直接将两种亲本细胞混合培养，后者需要制成一定浓度的细胞悬浮液。（2）细胞融合，加入促融因子于即将融合的细胞中，诱导融合。（3）杂种细胞筛选。
3. 细胞融合所必需的两个步骤为：①细胞间接触；②接触区的膜结构受到瞬间扰动而导致融合，只要其中任意一步具有特异性，就能形成特异性的细胞融合，激光诱导法。
4. 同种细胞在培养过程中，两个相邻的细胞自发合并，称为自发融合；异种细胞必须经过诱导剂处理才能融合，称为诱发融合。
5. （1）事先为两种原生质体融合设置识别标记，如色素、缺陷型、抗性标记等。（2）原生质体或细胞密度应在105个/ml，两种原生质体或细胞按1:1等量混合。（3）PEG诱导融合的效果与分子量大小及浓度高低密切相关。
融合后的杂交瘤细胞通常采用哪种培养基进行筛选纯化
细胞杂交瘤技术中，细胞融合的选择培养基包含三种关键成分：次黄嘌呤(H)、氨基喋呤(A)、胸腺嘧啶核苷(T)，简称为HAT培养基。
【答案】：用于筛选具有次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)和胸苷激酶(TK)活性缺陷细胞的培养基，内含次黄嘌呤(hypoxanthine)、氨基喋呤(aminopterin)和胸腺嘧啶核苷(thymidine)三种，简称HAT，这种选择培养基常用于筛选杂交瘤细胞。
在进行单抗制备时，细胞融合后通常使用HAT培养基进行筛选，以选出骨髓瘤和单抗免疫细胞成功融合的杂交瘤细胞，而其他细胞在这种培养基下会死亡，克隆化培养后，需要进行纯化，选出稳定单一的细胞株，以便进行下一步实验。
融合所用的瘤细胞是经过筛选的HGPRT缺陷细胞株，因此不能在HAT培养基中生长，也不合成或分泌免疫球蛋白，只有融合细胞具有亲代双方的遗传特性，能在HAT培养基中长期存活和繁殖，并分泌抗体。
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希望本篇文章《细胞融合技术解析，高效制备细胞融合培养基全攻略》能对你有所帮助！
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